ABSTRACT
En este trabajo se analizó el líquido de lavado intercelular de Lycopersicon escu-lentum ceraciforme L1568 perteneciente al germoplasma nacional con resistencia en campo a P. infestans el cual mostró la presencia de cuatro ß (1,3) glucanasas después de infección con el patógeno. Para tal efecto las plantas se inocularon con el patógeno con el fin de inducir aumento en la concentración de las proteínas PR y otras sustancias relacionadas con defensa; 15 días después de la inoculación con el parásito, se extrajo el líquido de lavado intercelular de las hojas de tomate utilizando agua. Las proteínas con actividad de ß (1,3) glucanasa extraídas se liofilizaron, se resuspendieron en búfer, se purificaron utilizando cromatografía de exclusión, intercambio iónico y electroforesis preparativa. Los resultados de caracterización parcial, mostraronlaexistenciadeuna ß (1,3) glucanasa básica con peso molecular de 36,8 kDa y pI 9,2 y tres ß (1,3) glucanasas ácidas de 35,4; 30,1 y 7,2 kDa con puntos isoeléctricos de 3,8; 3,6 y 5,0 respectivamente. Adicionalmente se determinaron las propiedades cinéticas de cada enzima, KM, Vmáx,Eo yK3 encontrando, de acuerdo con los resultados obtenidos, que la proteína básica no ha sido reportada en la literatura relacionada con tomate.
In this paper was analysed the intercellular washing fluid of Lycopersicon esculentum ceraciforme L1568 belonging to the national germplasm with resistance to P. infestans in field which showed the presence of four ß (1,3) glucanases after infection with the pathogen. For this purpose the plants were inoculated with the pathogen to induce a concentration increase of PR proteins and other defence-related substances, 15 days after inoculation with the parasite was extracted the intercellular washing fluid of tomato leaves using water. The proteins with ß(1,3) glucanase activity were extracted, freeze-dried and re-suspended in buffer solution and were purified using exclusion chromatography, ion exchange chromatography and preparative electrophoresis. The results of partial characterization showed the presence of a basic ß (1,3) glucanase with a molecular weight of 36.8 kDa and pi 9.2 and three ß (1,3) glu-canase acid 35.4, 30.1 and 7.2 kDa with isoelectric points of 3.8, 3.6 and 5.0 respectively. Additionally it was determined the kinetic properties of each enzyme, KM,Vmax, and Eo,K3, according to the results, the basic protein has not been reported in the literature related to tomato.
Este trabalho analisou o líquido de lavado intercelular de Lycopersicon esculentum ceraciforme L1568 pertencente ao ger-moplasma nacional com resistência em campo a P. infestans, mostrau a presença de quatro ß (1,3) glucanase despois a infecção com o agente patogênico. Para este efeito as plantas foram inoculadas com o agente patogénico para induzir um aumento na concentração das proteínas PR y outras substâncias relacionadas com defesa, e 15 dias mais tarde se extraiu o líquido de lavado intercelular de folhas de tomate utilizando água. As proteínas extraídas foram liofilizadas, resuspendidas em solução tampão, purificadas utilizando cromatografia de exclusão, de intercambio iónico e electroforesepreparativa,. Os resultados da caracterização paracial revelou a existência de uma ß(1,3) glucanasa basica com peso molecular de 36,8 kDa e PI 9,2, e três ß(1,3) glucanasas ácidas de 35.4, 30.1 e 7.2 kDa com pontos isoeléctricos de 3.8, 3.6y 5.0, respectivamente. Adicionalmente, foi possível determinar as propriedades cinéticas KM,Vmax,Eo yK3 de cada enzima, encontrando de acordo com os resultados que a proteína básica não havia sido reportada na literatura.relacionada com tomate.